α-2 antiplasmin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403792

Panoramica

SERPINF2 codifica l’α-2 antiplasmina umana, un inibitore circolante delle proteasi seriniche che rappresenta il principale inibitore fisiologico della plasmina e un regolatore chiave della fibrinolisi. Formando complessi stabili con la plasmina ed essendo reticolata nella fibrina dal fattore XIIIa, l’α-2 antiplasmina limita la degradazione del coagulo di fibrina e contribuisce a mantenere l’equilibrio tra coagulazione e proteolisi extracellulare. Questa attività collega SERPINF2 al sistema di attivazione del plasminogeno, al rimodellamento della fibrina e agli effetti a valle sul turnover della matrice e sull’omeostasi vascolare. Alterazioni della funzione o dell’espressione di SERPINF2 sono state associate a una capacità fibrinolitica disregolata e vengono studiate nel contesto di fenotipi emorragici e trombotici, oltre che in ambiti infiammatori e di rimodellamento tissutale in cui l’attività della plasmina è determinante.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-2 antiplasmin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SERPINF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SERPINF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SERPINF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-2 antiplasmin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SERPINF2 per lo studio della segnalazione di α-2 antiplasmin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SERPINF2 critici per la funzione di α-2 antiplasmin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SERPINF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-2 antiplasmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal α-2 antiplasmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SERPINF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-2 antiplasmin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR α-2 antiplasmin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SERPINF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SERPINF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.