9030612M13Rik Attivatori

Gli attivatori 9030612M13Rik più comuni includono, ma non solo, la forskolina CAS 66575-29-9, la ionomicina CAS 56092-82-1, il PMA CAS 16561-29-8, l'isoproterenolo cloridrato CAS 51-30-9 e l'istamina, base libera CAS 51-45-6.

Gli attivatori di 9030612M13Rik indicano una categoria di agenti chimici in grado di aumentare l'attività del gene 9030612M13Rik. La fase iniziale dell'identificazione di questi attivatori prevede l'uso dell'high-throughput screening (HTS), un metodo che facilita l'esame di una moltitudine di composti per la loro capacità di modulare l'espressione genica. A tale scopo si utilizza un saggio con gene reporter, in cui un gene reporter rilevabile - spesso codificante una proteina fluorescente o luminescente - viene posto sotto il controllo del promotore del gene 9030612M13Rik. Quando le cellule che ospitano questo costrutto sono esposte a varie sostanze chimiche, quelle che possono attivare il promotore innescano un aumento della produzione del gene reporter. L'aumento di fluorescenza o luminescenza che ne risulta viene poi misurato quantitativamente. I composti che determinano costantemente un aumento significativo del segnale del reporter sono considerati potenziali attivatori del gene 9030612M13Rik e vengono selezionati per un'analisi più approfondita che ne confermi l'attività.

La seconda fase di questo processo prevede la convalida della capacità di questi composti di upregolare il gene 9030612M13Rik a livello di mRNA e di proteine. La PCR quantitativa (qPCR) viene impiegata per misurare i livelli di mRNA di 9030612M13Rik dopo l'interazione con i composti. Un aumento dell'mRNA rilevato dalla qPCR è indicativo di un'elevata trascrizione, suggerendo che il composto può aumentare l'espressione genica a livello trascrizionale. Parallelamente, viene utilizzata l'analisi Western blot per determinare se l'aumento dei livelli di mRNA è correlato a un aumento del prodotto proteico del gene 9030612M13Rik. Questa tecnica prevede la separazione delle proteine mediante elettroforesi su gel, il loro trasferimento su una membrana e la successiva analisi con anticorpi specifici contro la proteina 9030612M13Rik. Un aumento dell'intensità della banda proteica, rispetto ai campioni di controllo, confermerebbe che il composto può effettivamente portare a un aumento del livello proteico.