ZHX2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-436490-LAC

Il gene murino **Zhx2** codifica la proteina **ZHX2** (zinc fingers and homeoboxes), un fattore di trascrizione nucleare che forma omo- ed eterodimeri con altri membri della famiglia ZHX per modulare programmi di espressione genica legati alla differenziazione e all’omeostasi tessuto-specifica. ZHX2 è stata associata alla regolazione delle reti metaboliche epatiche, della gestione di lipidi e glucosio e, più in generale, al controllo di stati trascrizionali correlati alla proliferazione tramite l’occupazione di promotori ed enhancer. Un’alterata attività di ZHX2 è stata riportata in contesti di biologia epatica e di riprogrammazione trascrizionale rilevante per i tumori, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico per studiare il crosstalk tra metabolismo e proliferazione. In quanto regolatore trascrizionale, ZHX2 è spesso studiata per comprendere come plasmi le decisioni di destino cellulare e l’espressione genica responsiva allo stress in sistemi di modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale ZHX2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Zhx2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ZHX2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Zhx2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ZHX2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Zhx2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.