ZFP100 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411821-ACT

Lo ZNF473 umano codifica la proteina a dita di zinco ZFP100, un presunto regolatore trascrizionale legante il DNA, caratterizzato da domini a dita di zinco di tipo C2H2 comunemente associati al controllo sequenza-specifico dell’espressione genica. Modulando l’attività di promotori ed enhancer, ZFP100 dovrebbe influenzare programmi trascrizionali dipendenti dalla cromatina che modellano l’identità cellulare, le risposte allo stress e i percorsi legati alla differenziazione. Un’alterata regolazione dei fattori di trascrizione a dita di zinco è spesso associata a stati epigenetici deregolati e a reti di segnalazione aberranti, rendendo ZNF473 un locus utile per indagare i meccanismi di controllo trascrizionale in contesti rilevanti per la malattia. La caratterizzazione delle reti geniche dipendenti da ZFP100 può supportare studi sul rimodellamento delle vie di segnalazione, sulla funzione degli elementi regolatori e sui cambiamenti trascrittomici nelle cellule umane.

ZFP100 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZNF473 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZFP100 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZNF473 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZNF473, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZFP100. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZNF473 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZFP100 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZFP100 nelle cellule tumorali con espressione di ZNF473 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.