Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZFP100: sc-411821-ACT

Le gène humain ZNF473 code la protéine à doigts de zinc ZFP100, un régulateur transcriptionnel putatif se liant à l’ADN, caractérisé par des domaines à doigts de zinc de type C2H2, couramment associés à un contrôle séquence-spécifique de l’expression génique. En modulant l’activité des promoteurs et des enhancers, ZFP100 est supposée influencer des programmes transcriptionnels dépendants de la chromatine qui façonnent l’identité cellulaire, les réponses au stress et les voies liées à la différenciation. Une régulation altérée des facteurs de transcription à doigts de zinc est fréquemment associée à des états épigénétiques dérégulés et à des réseaux de signalisation aberrants, faisant de ZNF473 un locus utile pour étudier les mécanismes du contrôle transcriptionnel dans des contextes pertinents pour la maladie. La caractérisation des réseaux géniques dépendants de ZFP100 peut soutenir des études sur le remodelage des voies, la fonction des éléments régulateurs et les changements transcriptomiques dans les cellules humaines.

ZFP100 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZNF473 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZFP100 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZNF473 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZNF473, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZFP100. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZNF473 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZFP100 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZFP100 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZNF473 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.