ZDHHC20 Plasmide Double Nickase (h): sc-406353-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZDHHC20 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZDHHC20 Double Nickase Plasmid (h) e il ZDHHC20 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ZDHHC20. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ZDHHC20 Antibody (A-4): sc-518217
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZDHHC20 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406353-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZDHHC20 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406353-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZDHHC20 codifica una palmitoiltransferasi della famiglia DHHC che catalizza la S-palmitoilazione dei substrati proteici, regolando l’associazione alla membrana, il traffico subcellulare e la stabilità delle proteine di segnalazione. Attraverso il controllo dinamico di questa modificazione lipidica, ZDHHC20 influenza processi quali la segnalazione dei recettori, il trasporto vescicolare e l’organizzazione dei microdomini di membrana che modulano le vie a valle. Programmi di palmitoilazione alterati che coinvolgono ZDHHC20 sono stati associati a fenotipi di crescita e migrazione cellulare disregolati e sono stati esplorati nel contesto della biologia del cancro e di altri disturbi in cui è compromessa la fedeltà della segnalazione di membrana. Di conseguenza, ZDHHC20 rappresenta un bersaglio utile per studiare come la localizzazione proteica dipendente dalla palmitoilazione influisca sulla trasduzione del segnale e sull’omeostasi cellulare in modelli umani.
ZDHHC20 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ZDHHC20 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ZDHHC20. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ZDHHC20. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ZDHHC20 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.