WTAP Plasmide Double Nickase (h): sc-403767-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- WTAP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il WTAP Double Nickase Plasmid (h) e il WTAP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira WTAP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: WTAP Antibody (D-7): sc-374280
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
WTAP Plasmide Double Nickase (h) | sc-403767-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WTAP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403767-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WTAP (proteina associata a Wilms tumor 1) è un componente centrale del complesso “writer” della N6-metiladenosina (m6A) dell’mRNA insieme a METTL3 e METTL14, coordinando la metilazione co-trascrizionale dell’RNA che influenza lo splicing del pre-mRNA, l’esportazione nucleare, la traduzione e la stabilità dei trascritti. Attraverso la regolazione di trascritti associati al ciclo cellulare e alla differenziazione, WTAP contribuisce a programmi di processamento dell’RNA che plasmano la proliferazione e le risposte allo stress. Un’espressione deregolata di WTAP o un’alterata attività della via m6A è stata collegata a reti di espressione genica modificate in molteplici tumori e contesti di sviluppo, rendendolo un nodo ampiamente studiato nel controllo epitranscrittomico. La perturbazione funzionale di WTAP viene quindi utilizzata per indagare i meccanismi dipendenti da m6A che governano il destino dei trascritti e il fenotipo cellulare.
WTAP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WTAP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WTAP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WTAP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WTAP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.