WDR36 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410298

Panoramica

WDR36 (WD repeat domain 36) codifica una proteina nucleolare con ripetizioni WD, implicata nella biogenesi dei ribosomi e nel processamento del pre-rRNA, favorendo la maturazione dell’rRNA 18S e l’assemblaggio della piccola subunità ribosomiale. Attraverso il suo ruolo nella funzione nucleolare e nel metabolismo dell’RNA, WDR36 influenza la proteostasi e i programmi di crescita cellulare che dipendono da una traduzione efficiente. Varianti genetiche e alterazioni della funzione di WDR36 sono state associate a fenotipi oculari, incluso il glaucoma primario ad angolo aperto, stimolando studi meccanicistici in tipi cellulari pertinenti. La perturbazione di WDR36 può inoltre essere utilizzata per indagare come alterazioni nella produzione dei ribosomi attivino risposte di stress nucleolare e la segnalazione a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR36 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WDR36 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WDR36 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WDR36 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina WDR36.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WDR36 per lo studio della segnalazione di WDR36, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni WDR36 critici per la funzione di WDR36
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WDR36 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal WDR36 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal WDR36 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WDR36. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal WDR36 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR WDR36 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WDR36 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WDR36 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.