Plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR36 (h): sc-410298

Présentation

WDR36 (WD repeat domain 36) code une protéine nucléolaire à répétitions WD impliquée dans la biogenèse des ribosomes et le traitement du pré-ARNr, en soutenant la maturation de l’ARNr 18S et l’assemblage de la petite sous-unité ribosomique. Par son rôle dans la fonction nucléolaire et le métabolisme des ARN, WDR36 influence la protéostasie et les programmes de croissance cellulaire qui dépendent d’une traduction efficace. Des variations génétiques et une altération de la fonction de WDR36 ont été associées à des phénotypes oculaires, notamment le glaucome primitif à angle ouvert, ce qui motive des études mécanistiques dans des types cellulaires pertinents. La perturbation de WDR36 peut également servir à examiner comment des altérations de la production ribosomique activent des réponses de stress nucléolaire et la signalisation en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR36 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène WDR36 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du WDR36, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert WDR36 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine WDR36.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en WDR36 pour l'étude de la signalisation de WDR36, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de WDR36 essentiels à la fonction de WDR36
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de WDR36 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le WDR36 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le WDR36 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus WDR36. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le WDR36 plasmide HDR (h) et le WDR36 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie WDR36 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles WDR36 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.