Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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VPRBP Plasmide Double Nickase (h): sc-403283-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VPRBP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il VPRBP Double Nickase Plasmid (h) e il VPRBP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DCAF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VPRBP Antibody (C-8): sc-376850
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VPRBP Plasmide Double Nickase (h) | sc-403283-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VPRBP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403283-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DCAF1 codifica VPRBP, un recettore di substrato per il complesso ligasi E3 dell’ubiquitina CUL4–DDB1, che contribuisce a indirizzare l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale di specifici bersagli proteici. Attraverso la regolazione della stabilità proteica, VPRBP partecipa al controllo della progressione del ciclo cellulare, delle risposte al danno al DNA e di processi associati alla cromatina che influenzano i programmi trascrizionali. VPRBP è stato inoltre collegato a reti di segnalazione che coinvolgono la regolazione delle chinasi e il controllo dei checkpoint, risultando quindi rilevante per studi sull’integrità del genoma e sullo stress proliferativo. La disregolazione dell’attività CUL4–DDB1–DCAF1 è stata associata ad alterazioni della proteostasi in contesti legati al cancro e in altri disturbi in cui la regolazione mediata dall’ubiquitina risulta compromessa.
VPRBP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCAF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCAF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCAF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCAF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.