Von Hippel Lindau/VHL Plasmide Double Nickase (m): sc-423671-NIC

Il gene Vhl del topo codifica il soppressore tumorale von Hippel–Lindau (VHL), la componente di riconoscimento del substrato di un complesso E3 ubiquitina ligasi di Cullin-2 che, in condizioni di normossia, indirizza HIF-α idrossilata verso l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale. Attraverso la regolazione della trascrizione dipendente da HIF, VHL controlla il sensing cellulare dell’ossigeno, i programmi genici angiogenici e metabolici, la segnalazione eritropoietica e l’adattamento redox. La perdita o l’attenuazione della funzione di VHL stabilizza HIF-1α/HIF-2α, rimodellando il flusso glicolitico e le vie di rimodellamento della matrice extracellulare e alterando l’espressione dei geni responsivi all’ipossia. Questi processi sono ampiamente utilizzati per modellare la segnalazione ipossica, la riprogrammazione metabolica e le risposte del microambiente rilevanti per la tumorigenesi e la biologia vascolare nei sistemi murini.

Von Hippel Lindau/VHL Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Vhl nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Vhl. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Vhl. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Vhl interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.