Plasmide Double Nickase (m) Von Hippel Lindau/VHL: sc-423671-NIC

Le gène murin **Vhl** code le suppresseur de tumeur von Hippel–Lindau (VHL), composant de reconnaissance du substrat d’un complexe ligase E3 d’ubiquitine de type Cullin-2, qui cible HIF-α hydroxylée pour son ubiquitination puis sa dégradation par le protéasome en conditions de normoxie. En régulant la transcription dépendante de HIF, VHL contrôle la détection cellulaire de l’oxygène, les programmes géniques angiogéniques et métaboliques, la signalisation érythropoïétique et l’adaptation redox. La perte ou l’atténuation de la fonction de VHL stabilise HIF-1α/HIF-2α, remodelant le flux glycolytique et les voies de remodelage de la matrice extracellulaire, et modifiant l’expression des gènes sensibles à l’hypoxie. Ces processus sont largement utilisés pour modéliser la signalisation de l’hypoxie, la reprogrammation métabolique et les réponses du microenvironnement pertinentes pour la tumorigenèse et la biologie vasculaire dans des systèmes murins.

Von Hippel Lindau/VHL Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Vhl dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Vhl. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Vhl. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Vhl.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.