Vav2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401490-ACT

Il gene umano **VAV2** codifica per Vav2, un fattore di scambio dei nucleotidi guaninici (GEF) della famiglia Rho che catalizza lo scambio GDP–GTP su Rac1, RhoA e Cdc42 per coordinare il rimodellamento del citoscheletro di actina, l’adesione cellulare e la migrazione direzionale. Vav2 funziona a valle delle tirosin-chinasi recettoriali, delle integrine e dei recettori immunitari, collegando i segnali extracellulari ai programmi citoscheletrici e trascrizionali attraverso vie che intersecano la segnalazione MAPK e PI3K. Attraverso questi ruoli, Vav2 contribuisce a regolare la morfologia cellulare, l’endocitosi e i cambiamenti della motilità e dei fenotipi legati all’invasione dipendenti dai segnali. Un’espressione o una segnalazione deregolate di VAV2 sono state associate a programmi anomali di proliferazione e migrazione nella biologia dei tumori e a contesti alterati di segnalazione immunitaria e vascolare rilevanti per i meccanismi di malattia.

Vav2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VAV2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Vav2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VAV2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VAV2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Vav2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VAV2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Vav2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Vav2 nelle cellule tumorali con espressione di VAV2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.