UGT2B28 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404211-ACT

UGT2B28 codifica una UDP‑glucuronosiltransferasi umana che catalizza la glucuronidazione di metaboliti endogeni e xenobiotici, aumentandone la solubilità e favorendone l’eliminazione cellulare. Questa attività di metabolismo di fase II contribuisce alla detossificazione e all’omeostasi ormonale modulando la disponibilità di substrati derivati dagli steroidi e di altri composti lipofili. L’espressione di UGT2B28 è regolata in modo dipendente dal tessuto e dal contesto, collegandola all’adattamento metabolico e alle risposte all’esposizione a sostanze chimiche. Alterazioni dell’attività di UGT2B28 e dei suoi pattern di espressione vengono spesso valutate in studi sul metabolismo dei farmaci, sulla segnalazione endocrina e su stati patologici in cui la gestione degli steroidi e le vie di detossificazione risultano compromesse.

UGT2B28 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di UGT2B28 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UGT2B28 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus UGT2B28 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione UGT2B28, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UGT2B28. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus UGT2B28 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UGT2B28 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UGT2B28 nelle cellule tumorali con espressione di UGT2B28 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.