UGCG Plasmide Double Nickase (m): sc-423600-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UGCG Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il UGCG Double Nickase Plasmid (m) e il UGCG Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ugcg. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: UGCG Antibody (1E5): sc-293235
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UGCG Plasmide Double Nickase (m) | sc-423600-NIC | 20 µg | $410.00 |
Nel topo, Ugcg codifica la UDP-glucosio ceramide glucosiltransferasi (UGCG), un enzima residente nel Golgi che catalizza il primo passaggio di glicosilazione convertendo la ceramide in glucosilceramide, avviando così la biosintesi dei glicosfingolipidi. Attraverso il controllo dei pool cellulari di ceramide e della produzione a valle di gangliosidi e globosidi, UGCG influenza la composizione dei microdomini di membrana, il traffico vescicolare e la segnalazione mediata da recettori. Un’alterata attività di UGCG compromette l’omeostasi degli sfingolipidi ed è stata associata a difetti del metabolismo lipidico, della segnalazione immunitaria e infiammatoria e a cambiamenti nelle risposte cellulari allo stress, rilevanti per fenotipi metabolici e neurobiologici. In quanto “guardiano” della via, UGCG è ampiamente studiata per il suo ruolo nel modulare la sensibilità all’apoptosi, i programmi di differenziamento e le reti di segnalazione dipendenti dalla membrana.
UGCG Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ugcg nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ugcg. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ugcg. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ugcg interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.