Plasmide Double Nickase (m) UGCG: sc-423600-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) UGCG correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide UGCG Double Nickase (m) et le plasmide UGCG Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ugcg. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: UGCG Antibody (1E5): sc-293235
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) UGCG | sc-423600-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Ugcg* code l’UDP-glucose céramide glucosyltransférase (UGCG), une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la première étape de glycosylation convertissant le céramide en glucosylcéramide, initiant ainsi la biosynthèse des glycosphingolipides. En contrôlant les pools cellulaires de céramide ainsi que la production en aval de gangliosides et de globosides, UGCG influence la composition des microdomaines membranaires, le trafic vésiculaire et la signalisation médiée par les récepteurs. Une activité modifiée d’UGCG perturbe l’homéostasie des sphingolipides et a été associée à des défauts du métabolisme lipidique, de la signalisation immunitaire et inflammatoire, ainsi qu’à des modifications des réponses cellulaires au stress pertinentes pour des phénotypes métaboliques et neurobiologiques. En tant que régulateur clé de la voie, UGCG est largement étudiée pour son rôle dans la modulation de la sensibilité à l’apoptose, des programmes de différenciation et des réseaux de signalisation dépendants de la membrane.
UGCG Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ugcg dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ugcg. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ugcg. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ugcg.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.