UFD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423598

Panoramica

Ufd1l codifica UFD1, un componente centrale del complesso segregasi UFD1–NPL4–VCP/p97, che riconosce ed estrae i substrati poliubiquitinati per la successiva elaborazione da parte del sistema ubiquitina–proteasoma. Collegando la segnalazione mediata dall’ubiquitina al rimodellamento proteico dipendente dall’ATP, UFD1 sostiene la degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD), il controllo qualità delle proteine mal ripiegate e la proteostasi in condizioni di stress cellulare. Questa via si integra anche con la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e la regolazione di programmi trascrizionali attraverso il turnover controllato di regolatori chiave. La disregolazione dei cofattori di p97 e dei componenti dell’ERAD è stata collegata a fenotipi di stress proteotossico e a contesti di biologia neurodegenerativa e dello sviluppo, rendendo Ufd1l un nodo utile per studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UFD1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ufd1l in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ufd1l insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ufd1l a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UFD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ufd1l per lo studio della segnalazione di UFD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ufd1l critici per la funzione di UFD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ufd1l per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UFD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UFD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ufd1l. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UFD1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UFD1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ufd1l per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ufd1l definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.