UDP-GlcDH Plasmide Double Nickase (h): sc-405002-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UDP-GlcDH Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il UDP-GlcDH Double Nickase Plasmid (h) e il UDP-GlcDH Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira UGDH. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: UDP-GlcDH Antibody (B-4): sc-137058
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UDP-GlcDH Plasmide Double Nickase (h) | sc-405002-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UDP-GlcDH Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405002-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **UGDH** codifica per la **UDP-glucosio 6-deidrogenasi** (UDP-GlcDH), un enzima citosolico che ossida l’UDP-glucosio ad **acido UDP-glucuronico**, un precursore centrale per la biosintesi di **glicosaminoglicani** e **proteoglicani**. Controllando la disponibilità di acido UDP-glucuronico, la UDP-GlcDH contribuisce a regolare la composizione della **matrice extracellulare**, l’architettura del **glicocalice** e le interazioni **cellula–cellula/cellula–matrice** che influenzano adesione, migrazione e **meccanotrasduzione**. L’attività di UGDH si integra con il metabolismo dei carboidrati e con le vie di interconversione degli **zuccheri nucleotidici** che sostengono i programmi di glicosilazione durante lo sviluppo e il rimodellamento tissutale. Un’espressione deregolata di UGDH o un flusso alterato verso l’acido UDP-glucuronico possono modificare la produzione di **ialuronano** e di GAG solfatati, collegando questo asse, in sistemi sperimentali, a fibrosi, segnalazione infiammatoria e riprogrammazione della matrice associata al cancro.
UDP-GlcDH Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UGDH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UGDH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UGDH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UGDH interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.