UBE2B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404361-ACT

UBE2B (enzima coniugante dell’ubiquitina E2 B) è un enzima umano E2 coniugante dell’ubiquitina che collabora con le ligasi E3 per catalizzare il trasferimento dell’ubiquitina ai substrati proteici, modulando la proteostasi attraverso il sistema ubiquitina–proteasoma. Contribuisce al turnover proteico regolato e al controllo della segnalazione, con ruoli consolidati nelle risposte al danno al DNA e in processi associati alla cromatina, inclusi eventi di ubiquitinazione che influenzano la scelta della via di riparazione. Attraverso queste attività, UBE2B incide sulla progressione del ciclo cellulare, sulla stabilità del genoma e sulle reti di segnalazione dello stress. L’alterazione della ubiquitinazione e della capacità di riparazione del DNA è ampiamente rilevante per l’oncogenesi e per altri disturbi legati a proteostasi e mantenimento del genoma compromessi, rendendo UBE2B un nodo utile per studi meccanicistici.

UBE2B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di UBE2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UBE2B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus UBE2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione UBE2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UBE2B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus UBE2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UBE2B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UBE2B nelle cellule tumorali con espressione di UBE2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.