TRRAP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402748-ACT

TRRAP (proteina associata al dominio di trasformazione/trascrizione) è una grande proteina adattatrice che funge da cofattore essenziale per molteplici complessi di iston-acetiltransferasi, tra cui SAGA e TIP60, collegando fattori di trascrizione specifici per sequenza al rimodellamento della cromatina. Coordinando la regolazione dell’espressione genica dipendente dall’acetilazione, TRRAP influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e i programmi di differenziamento. Partecipa a vie regolate dalle reti trascrizionali di MYC ed E2F e sostiene l’integrità del genoma attraverso il controllo, mediato dalla cromatina, dei processi di riparazione e dello stress associato alla replicazione. Un’attività di TRRAP disregolata e un’alterata assemblaggio dei complessi sono stati associati a stati trascrizionali oncogenici e a fenotipi di neurosviluppo, rendendola un bersaglio rilevante per studi meccanicistici della regolazione epigenetica.

TRRAP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TRRAP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TRRAP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TRRAP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TRRAP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TRRAP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TRRAP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TRRAP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TRRAP nelle cellule tumorali con espressione di TRRAP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.