TRM61 Plasmide Double Nickase (h): sc-408677-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRM61 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRM61 Double Nickase Plasmid (h) e il TRM61 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRMT61A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRM61 Antibody (C145I165): sc-81062
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRM61 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408677-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRM61 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408677-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRMT61A umano codifica TRM61, una subunità catalitica del complesso metiltransferasico della tRNA m1A58 che installa la N1-metiladenosina alla posizione 58 nei tRNA iniziatori ed elongatori. Questa modifica favorisce la stabilità strutturale dei tRNA, una corretta aminoacilazione e una traduzione accurata, collegando l’attività di TRM61 al processamento dell’RNA, alla proteostasi e alle risposte cellulari allo stress. L’alterazione delle vie di modificazione dei tRNA può compromettere il controllo traduttivo globale ed è stata associata, in sistemi modello, a difetti di crescita e a una sensibilità modificata allo stress metabolico e proteotossico. TRMT61A è quindi studiato nel contesto della regolazione epitranscrittomica dei tRNA, del controllo di qualità associato al ribosoma e di meccanismi rilevanti per la malattia legati a una sintesi proteica deregolata.
TRM61 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRMT61A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRMT61A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRMT61A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRMT61A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.