TNF-R1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400206-NIC

TNFRSF1A codifica TNF-R1, un recettore espresso in modo ubiquitario che lega il TNF-α per avviare la trasduzione del segnale che regola infiammazione, sopravvivenza cellulare e morte cellulare programmata. Il legame del ligando promuove l’assemblaggio di complessi associati al recettore, che possono attivare le vie canoniche di NF-κB e MAPK inducendo programmi genici di citochine e di risposta allo stress, oppure indirizzare la segnalazione verso apoptosi e necroptosi dipendenti dalle caspasi in specifici contesti regolatori. Attraverso queste biforcazioni di via, TNF-R1 influenza l’attivazione dell’immunità innata, l’omeostasi tissutale e le risposte di barriera endoteliali ed epiteliali. Una segnalazione disregolata di TNFRSF1A e varianti che alterano la funzione del recettore sono state collegate a fenotipi autoinfiammatori e a meccanismi più ampi di malattia infiammatoria, rendendolo un bersaglio comune per analizzare il comportamento delle reti guidate dal TNF.

TNF-R1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TNFRSF1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TNFRSF1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TNFRSF1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TNFRSF1A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.