TMED4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406737

Panoramica

TMED4 (nota anche come p25) è un membro della famiglia p24 di proteine transmembrana di tipo I che fungono da recettori di carico nella fase iniziale della via secretoria. Partecipa al traffico vescicolare dipendente da COPI e COPII tra il reticolo endoplasmatico e l’apparato di Golgi, sostenendo lo smistamento proteico, il controllo qualità e il mantenimento dell’omeostasi della via secretoria. Influenzando la dinamica del trasporto RE–Golgi, TMED4 può incidere sulla maturazione e sulla consegna in superficie di recettori di segnalazione e fattori secreti, collegandosi così a una regolazione più ampia della comunicazione cellulare. La disregolazione dei componenti del traffico secretorio, incluse le vie associate a TMED4, è stata indagata in contesti quali programmi di crescita oncogenica e fenotipi di adattamento allo stress rilevanti per la biologia delle malattie umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMED4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMED4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMED4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMED4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMED4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMED4 per lo studio della segnalazione di TMED4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMED4 critici per la funzione di TMED4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMED4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMED4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TMED4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMED4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMED4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TMED4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMED4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMED4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.