TLR8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431303

Panoramica

Tlr8 codifica il recettore Toll-like 8 (TLR8), un recettore endosomiale di riconoscimento dei pattern (pattern-recognition receptor, PRR) che rileva l’RNA a singolo filamento di origine patogena e alcuni agonisti sintetici selezionati per avviare la segnalazione dell’immunità innata. Una volta attivato, TLR8 ingaggia cascate dipendenti da MYD88 che convergono sulle vie di NF-κB e MAPK, promuovendo programmi trascrizionali per citochine infiammatorie e mediatori co-stimolatori che modellano le risposte mieloidi e linfoidi. Nel topo, TLR8 contribuisce alla regolazione dell’equilibrio delle citochine e al cross-talk tra i recettori endosomiali che riconoscono gli acidi nucleici, influenzando la presentazione dell’antigene e la successiva immunità adattativa. Una segnalazione mediata da TLR8 deregolata è stata associata a fenotipi infiammatori e a una difesa dell’ospite alterata, rendendola rilevante per studi sulla biologia delle infezioni, sui meccanismi dell’autoimmunità e sullo stress immunometabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TLR8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tlr8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tlr8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tlr8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TLR8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tlr8 per lo studio della segnalazione di TLR8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tlr8 critici per la funzione di TLR8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tlr8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TLR8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TLR8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tlr8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TLR8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TLR8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tlr8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tlr8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.