Plasmide CRISPR d'Activation (h) TIP60: sc-400810-ACT

KAT5 code pour TIP60 (KAT5), une histone acétyltransférase de la famille MYST qui acétyle les histones et des substrats non histoniques afin de réguler l’accessibilité de la chromatine, les programmes transcriptionnels et la stabilité du génome. TIP60 agit au sein de complexes multiprotéiques qui coordonnent la signalisation et la réparation des cassures double brin de l’ADN, notamment via des réponses dépendantes d’ATM, et module les points de contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et les voies liées au stress de réplication. Par ses fonctions dans le contrôle épigénétique et la réponse aux dommages de l’ADN, une activité altérée de TIP60 a été associée à des réseaux transcriptionnels dérégulés et à l’instabilité génomique observés dans de multiples contextes, notamment en cancérologie et en neurodégénérescence.

TIP60 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KAT5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TIP60 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KAT5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KAT5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TIP60. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KAT5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TIP60 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TIP60 dans les cellules tumorales présentant une expression de KAT5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.