THUMPD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420731

Panoramica

Thumpd3 codifica THUMPD3, una proteina contenente un dominio THUMP implicata in funzioni di legame all’RNA che supportano il metabolismo dell’RNA e la regolazione post-trascrizionale. I domini THUMP sono comunemente associati a enzimi di modifica di tRNA/rRNA e sono collegati a processi che influenzano la biogenesi dei ribosomi, la fedeltà della traduzione e le risposte cellulari allo stress. Nei sistemi murini, l’alterazione del processamento dell’RNA e del controllo della traduzione può influire sui programmi di proliferazione e differenziamento, rendendo THUMPD3 rilevante per lo studio dell’omeostasi dell’espressione genica. Vie alterate di modifica e processamento dell’RNA sono ampiamente collegate a fenotipi nello sviluppo neurobiologico, nella regolazione metabolica e nella biologia del cancro, fornendo un contesto meccanicistico per indagare le reti dipendenti da THUMPD3.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO THUMPD3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Thumpd3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Thumpd3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Thumpd3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina THUMPD3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Thumpd3 per lo studio della segnalazione di THUMPD3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Thumpd3 critici per la funzione di THUMPD3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Thumpd3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal THUMPD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal THUMPD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Thumpd3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal THUMPD3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR THUMPD3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Thumpd3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Thumpd3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.