TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400153-ACT

TGFBR1 (recettore del TGF beta 1; ALK5) codifica una chinasi transmembrana serina/treonina che funge da recettore principale per i ligandi TGF-β. In seguito al legame con il ligando e alla formazione del complesso con TGFBR2, TGFBR1 trasduce il segnale canonico mediato da SMAD2/3 e interagisce con le vie non canoniche MAPK, PI3K/AKT e delle GTPasi tipo Rho per regolare la transizione epitelio-mesenchimale, il rimodellamento della matrice extracellulare, il controllo del ciclo cellulare e la modulazione immunitaria. Una segnalazione di TGFBR1 deregolata è implicata nella fibrosi, in risposte infiammatorie aberranti e nella biologia del microambiente tumorale, dove cambiamenti dipendenti dal contesto nell’output della via possono alterare il controllo della crescita e la plasticità cellulare. In quanto nodo a monte della segnalazione, TGFBR1 è ampiamente studiato per il suo ruolo nella definizione dei pattern di sviluppo, nell’omeostasi tissutale e nel crosstalk tra vie che plasma i programmi trascrizionali.

TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TGFBR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TGFBR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TGFBR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TGF beta Receptor 1/TGFBR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TGFBR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TGF beta Receptor 1/TGFBR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TGF beta Receptor 1/TGFBR1 nelle cellule tumorali con espressione di TGFBR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.