TBX6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405632

Panoramica

TBX6 codifica un fattore di trascrizione della famiglia T-box che regola la specificazione del mesoderma e la strutturazione del mesoderma paraassiale durante le prime fasi dello sviluppo umano, coordinando programmi genici che guidano la formazione dei somiti e la segmentazione vertebrale. Agisce all’interno di reti trascrizionali che integrano segnali di sviluppo, incluse le vie Notch e WNT/β-catenina, per controllare l’impegno di linea e l’organizzazione assiale. Alterazioni del dosaggio o della funzione di TBX6 sono state associate a malformazioni congenite della colonna vertebrale e delle coste, rendendolo un nodo utile per studiare l’architettura genetica dello sviluppo vertebrale. Nei modelli cellulari, la perturbazione di TBX6 è comunemente impiegata per analizzare traiettorie di differenziamento, logica degli enhancer e decisioni di destino guidate da fattori di trascrizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TBX6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TBX6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TBX6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TBX6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TBX6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TBX6 per lo studio della segnalazione di TBX6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TBX6 critici per la funzione di TBX6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TBX6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TBX6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TBX6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TBX6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TBX6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TBX6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TBX6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TBX6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.