TAP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423266

Panoramica

Tap2 codifica per il trasportatore murino associato al processamento dell’antigene 2 (TAP2), un trasportatore della famiglia ABC (ATP-binding cassette) che forma un eterodimero con TAP1 per traslocare peptidi derivati dal proteasoma dal citosol al reticolo endoplasmatico, dove vengono caricati sulle molecole MHC di classe I. Questa attività è centrale per il processamento e la presentazione dell’antigene, collegando il turnover ubiquitina–proteasoma, il caricamento dei peptidi nel RE e la sorveglianza immunitaria delle cellule T CD8+. La funzione di TAP2 si integra con il complesso di caricamento dei peptidi e influenza la qualità e la diversità dell’immunopeptidoma MHC I, plasmando le risposte all’infezione e allo stress mediato dal sistema immunitario. Alterazioni dell’attività di TAP2 sono state associate a una ridotta espressione di MHC I sulla superficie cellulare e a fenotipi di evasione immunitaria rilevanti per la biologia dell’infiammazione e la ricerca in immunologia dei tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TAP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tap2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tap2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tap2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TAP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tap2 per lo studio della segnalazione di TAP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tap2 critici per la funzione di TAP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tap2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TAP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TAP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tap2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TAP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TAP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tap2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tap2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.