Plasmide Double Nickase (h2) SWAP-70: sc-403465-NIC-2

Le gène humain SWAP70 code SWAP-70, un adaptateur de signalisation se liant aux phosphatidylinositols, recruté sur des membranes activées en aval de PI3K, et qui favorise le remodelage du cytosquelette d’actine dépendant des GTPases de la famille Rho. SWAP-70 contribue à l’activation, à l’adhésion et à la migration des cellules immunitaires en coordonnant la dynamique du cytosquelette et la signalisation induite par les récepteurs, dans des processus tels que les réponses des lymphocytes B, le trafic dépendant de l’antigène et les fonctions phagocytaires. La dérégulation des voies liées à SWAP70 a été étudiée dans le contexte de dysfonctions immunitaires et de la motilité/invasion des cellules tumorales, où un remodelage altéré de l’actine peut influencer le comportement cellulaire. Des modèles de perturbation de SWAP70 permettent des études mécanistiques de la signalisation PI3K–Rac/Rho, du trafic membranaire et de phénotypes contrôlés par le cytosquelette, en utilisant l’édition génomique pour analyser les effets sur la migration, la morphologie et les sorties de signalisation dépendantes des stimuli.

SWAP-70 Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SWAP70 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SWAP70. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SWAP70. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SWAP70.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.