Stim2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403491-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Stim2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Stim2 Double Nickase Plasmid (h) e il Stim2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira STIM2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Stim2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403491-NIC | 20 µg | $410.00 |
STIM2 (stromal interaction molecule 2) codifica un sensore del Ca²⁺ del reticolo endoplasmatico che collega lo stato delle riserve di Ca²⁺ nel RE all’ingresso di Ca²⁺ attraverso la membrana plasmatica, attivando l’ingresso di calcio operato dallo svuotamento delle riserve (SOCE) tramite i canali ORAI. Modulando la segnalazione del Ca²⁺ basale e sostenuta, STIM2 influenza vie a valle che includono i programmi trascrizionali calcineurina–NFAT, la segnalazione MAPK e la regolazione Ca²⁺-dipendente della secrezione e della funzione mitocondriale. L’attività di STIM2 è rilevante per processi cellulari quali la trasmissione sinaptica, l’attivazione delle cellule immunitarie e le risposte allo stress legate all’omeostasi del RE. Una SOCE deregolata e alterazioni dell’espressione o della funzione di STIM2 sono state associate a fenotipi neurodegenerativi, alla segnalazione infiammatoria e al rimodellamento della segnalazione del calcio correlato al cancro, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici.
Stim2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus STIM2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di STIM2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di STIM2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con STIM2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.