STC2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423183

Panoramica

Stc2 codifica la stanniocalcina 2 (STC2), una glicoproteina secreta implicata nell’omeostasi del calcio e del fosfato e nell’adattamento cellulare allo stress metabolico e del microambiente. Nelle cellule di topo, l’espressione di STC2 è regolata da vie di segnalazione sensibili allo stress ed è comunemente associata allo stress del reticolo endoplasmatico e ai programmi della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR), favorendo la sopravvivenza in condizioni di ipossia o di limitazione di nutrienti. STC2 è stata collegata alla modulazione della segnalazione dei fattori di crescita, dell’equilibrio redox e della proteostasi, configurandosi come un nodo funzionale in vie che influenzano proliferazione e differenziamento. Alterazioni dell’attività di STC2 sono state riportate in diversi contesti rilevanti per la patologia, inclusi fenotipi associati al cancro, stress infiammatorio e disregolazione metabolica, rendendo Stc2 un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli mammiferi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO STC2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Stc2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Stc2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Stc2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina STC2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Stc2 per lo studio della segnalazione di STC2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Stc2 critici per la funzione di STC2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Stc2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal STC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal STC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Stc2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal STC2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR STC2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Stc2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Stc2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.