Stat3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423176-ACT

Il trasduttore di segnale e attivatore della trascrizione 3 (Stat3) è un fattore di trascrizione centrale nelle cellule di topo che trasmette i segnali dai recettori per citochine e fattori di crescita al nucleo, in modo particolarmente rilevante a valle delle chinasi JAK in seguito alla segnalazione della famiglia dell’IL-6. Una volta attivato, Stat3 regola programmi genici che controllano proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e risposte infiammatorie, integrando il crosstalk con le vie MAPK e PI3K–AKT. L’attività di Stat3 influenza la polarizzazione delle cellule immunitarie e l’omeostasi tissutale, e una segnalazione STAT3 deregolata è ampiamente studiata nell’infiammazione, nella fibrosi, nello stress metabolico e nelle reti trascrizionali oncogeniche. Nel sistema nervoso e in contesti di cellule staminali/progenitrici, Stat3 contribuisce anche alle decisioni di destino di linea e alla trascrizione in risposta allo stress.

Stat3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Stat3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Stat3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Stat3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Stat3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Stat3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Stat3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Stat3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Stat3 nelle cellule tumorali con espressione di Stat3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.