STAMBP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404726

Panoramica

STAMBP codifica un enzima deubiquitinante della famiglia JAMM (AMSH) che si lega a componenti di ESCRT-0 come STAM e HGS per modificare le catene di ubiquitina sui carichi endocitati. Regolando lo smistamento dipendente dall’ubiquitina, STAMBP contribuisce a controllare la downregolazione dei recettori, il traffico endosomiale e la degradazione lisosomiale, plasmando così gli output di segnalazione di vie che includono EGFR e altri recettori per fattori di crescita. L’attività di STAMBP contribuisce alla proteostasi e alle risposte cellulari allo stress attraverso la modulazione della topologia delle catene di ubiquitina e delle decisioni sul destino dei carichi negli endosomi precoci. L’alterazione di STAMBP è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e a disregolazione immunitaria, rendendolo un bersaglio utile per studiare difetti della via endosoma–lisosoma e la segnalazione mediata dall’ubiquitina nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO STAMBP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STAMBP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STAMBP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STAMBP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina STAMBP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STAMBP per lo studio della segnalazione di STAMBP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni STAMBP critici per la funzione di STAMBP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STAMBP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal STAMBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal STAMBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STAMBP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal STAMBP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR STAMBP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STAMBP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STAMBP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.