SPUVE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406568

Panoramica

PRSS23 codifica la serin-proteasi SPUVE, un enzima di tipo tripsina implicato nella proteolisi pericellulare e nel rimodellamento dell’ambiente extracellulare. L’attività di SPUVE è stata collegata alla regolazione del comportamento delle cellule epiteliali e stromali, inclusi migrazione, adesione e programmi di differenziamento che si intrecciano con la segnalazione attivata da proteasi e con la dinamica della matrice extracellulare. Studi di espressione e funzionali associano PRSS23 a contesti ormono-responsivi e infiammatori, suggerendone la rilevanza nel rimodellamento tissutale e in fenotipi di crescita disregolata. Queste proprietà rendono PRSS23 un bersaglio utile per analizzare vie dipendenti da proteasi che influenzano le transizioni di stato cellulare e le interazioni con il microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPUVE (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRSS23 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRSS23 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRSS23 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPUVE.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRSS23 per lo studio della segnalazione di SPUVE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRSS23 critici per la funzione di SPUVE
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRSS23 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPUVE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPUVE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRSS23. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPUVE Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPUVE (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRSS23 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRSS23 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.