SPTLC3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407807-ACT

SPTLC3は、セリンとパルミトイルCoAを縮合させてde novoスフィンゴ脂質生合成を開始する律速酵素であるセリンパルミトイルトランスフェラーゼの触媒サブユニットをコードしています。スフィンゴイド塩基、セラミド、ならびに下流の複合スフィンゴ脂質の量を調節することで、SPTLC3は膜組成、脂質ラフトの構築、そしてアポトーシス・炎症・代謝適応に関連するシグナル伝達過程に影響を与えます。SPTLC3活性は小胞体における脂質恒常性とも連動し、セラミド代謝を細胞ストレス応答へと結びつけるより広範な経路にも関与します。スフィンゴ脂質プロファイルの変化やSPTLC3発現の異常は、心血管代謝形質および炎症性表現型と関連づけられており、脂質駆動型シグナルの機序研究における有用な結節点となります。

SPTLC3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SPTLC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SPTLC3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SPTLC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSPTLC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SPTLC3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSPTLC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSPTLC3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSPTLC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSPTLC3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。