SPLUNC2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406336

Panoramica

BPIFA2 codifica SPLUNC2, un membro secreto della famiglia delle proteine contenenti il fold BPI, espresso negli epiteli delle alte vie aeree e delle ghiandole salivari. SPLUNC2 contribuisce alla difesa innata mucosale interagendo con componenti microbiche e influenzando l’omeostasi del liquido di superficie delle vie aeree, collegando la funzione di barriera epiteliale ai programmi di segnalazione infiammatoria. Grazie ai suoi ruoli nelle interazioni ospite–microbo e nella modulazione delle risposte immunitarie locali, BPIFA2 è spesso oggetto di studi sull’infiammazione del tratto respiratorio, sulla suscettibilità alle infezioni e sul rimodellamento epiteliale. Alterazioni dell’espressione di BPIFA2/SPLUNC2 sono state associate a fenotipi di malattie delle vie aeree e vengono utilizzate come readout molecolare in modelli di condizioni infiammatorie sinonasali e polmonari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPLUNC2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BPIFA2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BPIFA2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BPIFA2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPLUNC2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BPIFA2 per lo studio della segnalazione di SPLUNC2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BPIFA2 critici per la funzione di SPLUNC2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BPIFA2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPLUNC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPLUNC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BPIFA2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPLUNC2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPLUNC2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BPIFA2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BPIFA2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.