SP-lyase Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402278-LAC

SGPL1 umano codifica la liasi della sfingosina-1-fosfato (SP-lyase), un enzima associato al reticolo endoplasmatico che catalizza la degradazione irreversibile della sfingosina-1-fosfato (S1P) in fosfoetanolammina ed esadecenale. Terminando la segnalazione mediata da S1P, la SP-lyase contribuisce a regolare l’omeostasi degli sfingolipidi e l’equilibrio tra sfingolipidi pro-sopravvivenza e ceramidi pro-apoptotiche, influenzando la crescita cellulare, le risposte allo stress e i segnali di traffico legati al sistema immunitario. L’attività di SGPL1 si interfaccia con il metabolismo degli sfingolipidi, la biosintesi dei fosfolipidi e le vie di segnalazione lipidica che modulano la funzione mitocondriale e i programmi infiammatori. La disregolazione di SGPL1 è stata collegata a fenotipi metabolici e steroidogenici ereditari, nonché a contesti più ampi di disfunzione renale, endocrina e del neurosviluppo, a supporto del suo studio in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale SP-lyase (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SGPL1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SP-lyase (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SGPL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SP-lyase. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SGPL1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.