SNX3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404028

Panoramica

SNX3 umano codifica sorting nexin 3, una proteina endosomiale contenente un dominio PX che si lega al fosfatidilinositolo 3-fosfato e contribuisce a organizzare il traffico di membrana negli endosomi precoci. SNX3 funge da componente accessorio chiave della via del retromer, supportando il riciclo endosoma-Golgi ed endosoma-membrana plasmatica di specifici carichi transmembrana e contribuendo allo smistamento dei recettori, all’omeostasi dei trasportatori di nutrienti e all’attenuazione dei segnali. Attraverso il suo ruolo nello smistamento endosomiale e nel recupero dei carichi, SNX3 influenza processi legati alla segnalazione Wnt, al turnover dei recettori di membrana e alla polarità cellulare. Alterazioni del traffico endosomiale e lo smistamento errato dei carichi associati al retromer sono implicati in fenotipi neurodegenerativi e associati al cancro, rendendo SNX3 un nodo utile per studi meccanicistici della biologia delle malattie dipendente dal traffico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SNX3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SNX3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SNX3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SNX3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SNX3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SNX3 per lo studio della segnalazione di SNX3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SNX3 critici per la funzione di SNX3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SNX3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SNX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SNX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SNX3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SNX3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SNX3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SNX3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SNX3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.