SNAI 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400244-ACT

SNAI1 codifica SNAI1 (Snail), un repressore trascrizionale a dita di zinco che orchestra la transizione epitelio‑mesenchimale (EMT) sopprimendo direttamente i programmi genici epiteliali, incluso CDH1, e promuovendo fenotipi mesenchimali. Attraverso interazioni con le reti di segnalazione TGF‑β, Wnt/β‑catenina, Notch e infiammatorie, SNAI1 regola adesione cellulare, polarità, motilità e plasticità di linea durante lo sviluppo e il rimodellamento tissutale. Un’attività deregolata di SNAI1 è spesso associata a caratteristiche di progressione tumorale come invasione, disseminazione metastatica, stati simil‑staminali e resistenza alle terapie, e contribuisce anche a programmi trascrizionali associati alla fibrosi. Queste caratteristiche rendono SNAI1 un nodo centrale per lo studio del controllo trascrizionale dell’EMT, del rimodellamento della cromatina e delle transizioni di stato cellulare guidate dal microambiente.

SNAI 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNAI1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SNAI 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNAI1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNAI1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SNAI 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNAI1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SNAI 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SNAI 1 nelle cellule tumorali con espressione di SNAI1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.