SLC6A14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408198

Panoramica

SLC6A14 (noto anche come ATB0,+) codifica un trasportatore di membrana plasmatica dipendente da sodio e cloruro, che media l’assorbimento concentrativo di amminoacidi neutri e cationici, con una notevole capacità di trasportare un ampio spettro di substrati, inclusi gli amminoacidi essenziali. Regolando la disponibilità intracellulare di amminoacidi, SLC6A14 influenza le vie di nutrient-sensing e di segnalazione metabolica come mTORC1, modulando la crescita cellulare, l’equilibrio redox e l’adattamento allo stress. La sua espressione è stata associata alla fisiologia del trasporto epiteliale e ad alterazioni del flusso di amminoacidi in contesti patologici in cui l’acquisizione di nutrienti e il metabolismo vengono riprogrammati. In quanto solute carrier sulla superficie cellulare, SLC6A14 rappresenta un nodo accessibile per analizzare il contributo del trasporto di amminoacidi a proliferazione, differenziamento e interazioni immuno-metaboliche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC6A14 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC6A14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC6A14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC6A14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SLC6A14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC6A14 per lo studio della segnalazione di SLC6A14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC6A14 critici per la funzione di SLC6A14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC6A14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SLC6A14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SLC6A14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC6A14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SLC6A14 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SLC6A14 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC6A14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC6A14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.