SLC25A11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404380-ACT

SLC25A11 (trasportatore mitocondriale 2-ossoglutarato/malato, OGC) è un trasportatore di soluti della membrana mitocondriale interna che scambia malato con 2-ossoglutarato, collegando il ciclo degli acidi tricarbossilici (TCA) al metabolismo citosolico. Supportando la navetta malato–aspartato e l’equilibrio redox mitocondriale, SLC25A11 contribuisce a regolare l’omeostasi NADH/NAD⁺, l’anaplerosi e il metabolismo ossidativo. La sua attività si intreccia con il flusso di carbonio guidato dalla glutammina, con la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e con la riprogrammazione metabolica osservata in stati cellulari proliferativi e adattati allo stress. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SLC25A11 sono state associate a una disregolazione metabolica rilevante per la biologia tumorale, la disfunzione mitocondriale e la suscettibilità allo stress ossidativo in diversi sistemi sperimentali.

SLC25A11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC25A11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SLC25A11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC25A11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC25A11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SLC25A11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC25A11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SLC25A11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SLC25A11 nelle cellule tumorali con espressione di SLC25A11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.