Plasmide Double Nickase (h) SF2/ASF: sc-400737-NIC

Le gène humain **SRSF1** code le facteur d’épissage **SF2/ASF**, une protéine de liaison à l’ARN riche en domaines SR qui couple l’épissage du pré-ARNm à l’export, à la stabilité et à la traduction de l’ARNm. En reconnaissant des éléments exoniques activateurs de l’épissage et en coordonnant l’assemblage du spliceosome, SF2/ASF façonne des programmes d’épissage alternatif qui influencent la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et l’expression génique en réponse au stress. L’activité de SRSF1 s’intègre à des voies de signalisation dépendantes de la phosphorylation et à des réseaux de maturation de l’ARN, notamment via la régulation d’isoformes de transcrits qui modulent des sorties associées aux voies MAPK/PI3K. Une expression dérégulée de SRSF1 ou un contrôle altéré de l’épissage a été associé à une utilisation aberrante des isoformes et à des phénotypes oncogéniques dans de nombreux contextes tumoraux, ce qui en fait un nœud central pour l’étude des mécanismes pathologiques induits par la maturation de l’ARN.

SF2/ASF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SRSF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SRSF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SRSF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SRSF1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.