SF2/ASF Plasmide Double Nickase (h): sc-400737-NIC

Il gene umano **SRSF1** codifica il fattore di splicing **SF2/ASF**, una proteina legante l’RNA ricca in domini SR che collega lo splicing del pre‑mRNA all’esportazione, alla stabilità e alla traduzione dell’mRNA. Riconoscendo gli enhancer esonici dello splicing e coordinando l’assemblaggio dello spliceosoma, SF2/ASF modella programmi di splicing alternativo che influenzano la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e l’espressione genica in risposta allo stress. L’attività di SRSF1 è integrata con la segnalazione dipendente dalla fosforilazione e con reti di processamento dell’RNA, inclusa la regolazione di isoforme trascrittomiche che modulano gli output associati a MAPK/PI3K. Un’espressione deregolata di SRSF1 o un controllo alterato dello splicing sono stati collegati a un uso aberrante delle isoforme e a fenotipi oncogeni in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo chiave per lo studio dei meccanismi di malattia guidati dal processamento dell’RNA.

SF2/ASF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SRSF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SRSF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SRSF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SRSF1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.