SEMA3E Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404797-LAC

SEMA3E codifica la semaforina-3E, un segnale guida secreto che trasduce il segnale principalmente attraverso recettori plexinici per regolare il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare direzionale e le interazioni cellula–cellula. Nelle cellule umane, SEMA3E influenza la guida assonale, la strutturazione della vascolarizzazione e l’organizzazione epiteliale modulando la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e le vie a valle che controllano adesione e motilità. Una segnalazione di SEMA3E deregolata è stata associata a risposte angiogeniche alterate e a fenotipi invasivi in molteplici contesti oncologici, ed è inoltre studiata in processi di neurosviluppo e infiammatori. Queste proprietà rendono SEMA3E un bersaglio utile per analizzare i meccanismi della segnalazione del microambiente, i circuiti di migrazione e i programmi di guida mediati da recettori.

Le particelle di attivazione lentivirale SEMA3E (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SEMA3E in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SEMA3E (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SEMA3E, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SEMA3E. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SEMA3E e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.