Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Sec61β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425892
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sec61β Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Sec61β, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sec61β Antibody (E-6): sc-393633
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sec61β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-425892 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SEC61B codifica la subunità beta del traslocone Sec61, un componente fondamentale del canale di membrana del reticolo endoplasmatico (RE) che media l’importazione co-traduzionale delle proteine e l’integrazione dei polipeptidi nascenti nella via secretoria. Nelle cellule murine, Sec61β supporta la biogenesi delle proteine del RE, coordina l’ancoraggio dei ribosomi e contribuisce ai processi di proteostasi del RE legati al ripiegamento e alla degradazione associata al RE (ERAD). Un’alterazione della funzione del traslocone può perturbare la secrezione, l’omeostasi delle proteine di membrana e la segnalazione della risposta alle proteine non ripiegate (unfolded protein response), collegando l’attività del complesso SEC61 all’adattamento cellulare allo stress. Poiché l’integrità della via secretoria è alla base della segnalazione immunitaria, del metabolismo e della funzione neuronale, Sec61b viene spesso studiato nel contesto di squilibri della proteostasi e di meccanismi di malattia correlati allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec61β (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sec61b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sec61b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sec61b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sec61β.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sec61b per lo studio della segnalazione di Sec61β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Sec61b critici per la funzione di Sec61β
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sec61b per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Sec61β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Sec61β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sec61b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Sec61β Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Sec61β (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sec61b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sec61b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.