SCUBE2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410079-ACT

SCUBE2 (signal peptide, dominio CUB, dominio simile all’EGF 2) codifica una glicoproteina secreta associata alla superficie cellulare che modula la segnalazione extracellulare e la comunicazione cellula-cellula. Attraverso i suoi domini CUB e simili all’EGF, SCUBE2 è implicata nella regolazione della disponibilità dei fattori di crescita e della dinamica di segnalazione dei recettori, con collegamenti riportati a programmi di sviluppo e a comportamenti di cellule endoteliali o epiteliali. Un’alterata espressione di SCUBE2 è stata associata a proliferazione, migrazione e differenziazione deregolate in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi la biologia del cancro e il rimodellamento vascolare. In quanto regolatore extracellulare legato a specifiche vie di segnalazione, SCUBE2 viene spesso studiata per il suo impatto sulle reti di signaling che modellano l’organizzazione tissutale e le interazioni del microambiente tumorale.

SCUBE2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SCUBE2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SCUBE2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SCUBE2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SCUBE2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SCUBE2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SCUBE2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SCUBE2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SCUBE2 nelle cellule tumorali con espressione di SCUBE2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.