SCD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401516

Panoramica

La stearoil-CoA desaturasi (SCD) è un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che introduce un doppio legame cis negli acil-CoA di acidi grassi saturi, generando acidi grassi monoinsaturi come oleato e palmitoleato. Controllando il rapporto tra lipidi saturi e monoinsaturi, SCD influenza la fluidità di membrana, la biogenesi delle goccioline lipidiche e la sintesi di trigliceridi, esteri del colesterolo e fosfolipidi. L’attività di SCD si integra con programmi metabolici centrali, tra cui la lipogenesi dipendente da SREBP, il rilevamento energetico mediato da AMPK e le risposte allo stress del RE. Un’espressione deregolata di SCD e una capacità di desaturazione alterata sono state associate a cambiamenti dell’omeostasi metabolica e al rimodellamento lipidico osservati in contesti quali resistenza all’insulina, steatosi e adattamento delle cellule tumorali allo stress da carenza di nutrienti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SCD (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SCD in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SCD insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SCD a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SCD.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SCD per lo studio della segnalazione di SCD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SCD critici per la funzione di SCD
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SCD per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SCD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SCD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SCD. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SCD Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SCD (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SCD per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SCD definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.