Plasmide Double Nickase (h) Sab: sc-405461-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Sab correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Sab Double Nickase (h) et le plasmide Sab Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SH3BP5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Sab Antibody (A-3): sc-390512
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Sab | sc-405461-NIC | 20 µg | $410.00 |
SH3BP5 code Sab, une protéine d’échafaudage de la membrane externe mitochondriale qui se lie aux kinases activées par le stress et contribue à organiser la signalisation JNK au niveau des mitochondries. En régulant la localisation des kinases et les interactions avec les réponses au stress dépendantes des MAPK, Sab influence la fonction mitochondriale, l’équilibre rédox et les voies de signalisation liées à l’apoptose. Une activité altérée de la voie Sab/JNK a été associée aux réponses cellulaires aux lésions et fait l’objet d’études dans des contextes de stress métabolique, de signalisation inflammatoire et de dysfonctionnement mitochondrial pertinent pour la neurodégénérescence. En tant que nœud reliant des signaux de stress cytosoliques à des effets mitochondriaux, SH3BP5 est couramment étudié pour son impact sur la dynamique mitochondriale et les décisions de destinée cellulaire.
Sab Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SH3BP5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SH3BP5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SH3BP5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SH3BP5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.