Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RPA194 Plasmide Double Nickase (h): sc-400816-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RPA194 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RPA194 Double Nickase Plasmid (h) e il RPA194 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira POLR1A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RPA194 Antibody (C-1): sc-48385
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RPA194 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400816-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RPA194 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400816-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
POLR1A codifica RPA194, la subunità catalitica dell’RNA polimerasi I che nel nucleolo guida la sintesi del pre-rRNA 47S, una fase limitante per la biogenesi dei ribosomi. RPA194 opera all’interno del macchinario trascrizionale di Pol I per sostenere l’organizzazione nucleolare, la crescita cellulare e il coordinamento della maturazione dell’RNA ribosomiale con lo stato metabolico della cellula. La perturbazione della trascrizione di rRNA dipendente da POLR1A altera la segnalazione dello stress nucleolare e le successive risposte associate a p53, collegando questa via al controllo del ciclo cellulare e alla sorveglianza del genoma. La variazione genetica e la disregolazione dell’attività di Pol I sono state associate a fenotipi correlati alle ribosomopatie e sono ampiamente studiate nel contesto della biologia proliferativa e dell’adattamento allo stress.
RPA194 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus POLR1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di POLR1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di POLR1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con POLR1A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.