RNF31 Plasmide Double Nickase (h): sc-412436-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF31 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF31 Double Nickase Plasmid (h) e il RNF31 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF31. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF31 Plasmide Double Nickase (h) | sc-412436-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF31 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-412436-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF31 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina che funge da nucleo catalitico del complesso di assemblaggio di catene di ubiquitina lineare (LUBAC), generando catene di ubiquitina legate a Met1 che modulano la trasduzione del segnale. Attraverso la regolazione di NF-κB e della segnalazione dell’immunità innata, RNF31 contribuisce a controllare l’espressione dei geni infiammatori, la resistenza all’apoptosi e le risposte cellulari allo stress. La sua attività influenza il rimodellamento, dipendente dall’ubiquitina, dei complessi di segnalazione a valle di recettori come TNFR e dei recettori di riconoscimento del patogeno. Una funzione deregolata di RNF31/LUBAC è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria e a contesti di segnalazione oncogenica, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul controllo delle vie di segnalazione guidato dall’ubiquitinazione.
RNF31 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF31 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF31. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF31. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF31 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.