RNF123 Plasmide Double Nickase (m): sc-429979-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF123 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF123 Double Nickase Plasmid (m) e il RNF123 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Rnf123. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF123 Plasmide Double Nickase (m) | sc-429979-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF123 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-429979-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Rnf123 codifica l’E3 ubiquitina ligasi RNF123 (nota anche come KPC1), una proteina con dominio RING finger che contribuisce alla proteostasi dipendente dall’ubiquitina catalizzando l’ubiquitinazione dei substrati e indirizzando le proteine verso il proteasoma 26S. RNF123 è stata collegata alla regolazione della progressione del ciclo cellulare, incluso il turnover di regolatori del ciclo come CDKN1B/p27, e può influenzare checkpoint, proliferazione e risposte allo stress cellulare attraverso le vie ubiquitina–proteasoma. Nei modelli murini, la perturbazione della funzione di RNF123 è quindi rilevante per analizzare le reti di segnalazione dell’ubiquitina che intersecano il controllo della crescita, la differenziazione e l’omeostasi tissutale. Alterazioni dell’ubiquitinazione e della degradazione mediata dal proteasoma sono ampiamente implicate nella ricerca oncologica e neurobiologica, rendendo RNF123 un nodo utile per studi meccanicistici su squilibri di proteostasi e di segnalazione associati a malattie.
RNF123 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Rnf123 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Rnf123. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Rnf123. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Rnf123 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.