RGNEF Plasmide Double Nickase (h): sc-404155-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RGNEF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RGNEF Double Nickase Plasmid (h) e il RGNEF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARHGEF28. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RGNEF Plasmide Double Nickase (h) | sc-404155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RGNEF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGEF28 codifica RGNEF, un fattore di scambio di nucleotidi guaninici (GEF) per Rho che attiva le GTPasi della famiglia Rho per coordinare il rimodellamento del citoscheletro di actina, le dinamiche di adesione cellulare e la migrazione direzionale. Attraverso l’accoppiamento con la segnalazione dipendente da RhoA e con effettori a valle come ROCK e i moduli di contrattilità della miosina, RGNEF contribuisce a regolare il turnover delle adesioni focali e la tensione del citoscheletro. RGNEF contiene anche caratteristiche di legame all’RNA che sono state collegate alla biologia dei granuli di stress e alla regolazione del destino dell’mRNA, mettendo in relazione la segnalazione del citoscheletro con il controllo post-trascrizionale. La disregolazione delle vie associate ad ARHGEF28/RGNEF è stata studiata in contesti che includono programmi di motilità alterati e meccanismi di aggregazione RNA/proteine rilevanti per la neurodegenerazione, a supporto del suo impiego come bersaglio di ricerca in studi di vie di segnalazione e fenotipi.
RGNEF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARHGEF28 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARHGEF28. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARHGEF28. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARHGEF28 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.