rapsyn Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422599

Panoramica

Rapsn codifica per la rapsina, una proteina di impalcatura postsinaptica che ancora e raggruppa i recettori nicotinici dell’acetilcolina (AChR) alla giunzione neuromuscolare, coordinando la maturazione e il mantenimento della sinapsi. Attraverso interazioni con le subunità dell’AChR e con componenti del citoscheletro, la rapsina favorisce la stabilizzazione dei recettori, l’organizzazione della placca motrice e un’efficiente trasmissione neuromuscolare. L’alterazione del clustering dipendente da Rapsn compromette l’architettura sinaptica e la segnalazione alla placca motrice, collegando questa via alla disfunzione della giunzione neuromuscolare. Rapsn nel topo è quindi ampiamente utilizzato per modellare i meccanismi che regolano la sinaptogenesi, il traffico dei recettori e la stabilità sinaptica nel muscolo scheletrico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO rapsyn (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rapsn in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rapsn insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rapsn a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina rapsyn.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rapsn per lo studio della segnalazione di rapsyn, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rapsn critici per la funzione di rapsyn
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rapsn per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal rapsyn CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal rapsyn CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rapsn. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal rapsyn Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR rapsyn (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rapsn per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rapsn definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.