PSS1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422474-LAC

Il gene murino Ptdss1 codifica la fosfatidilserina sintasi 1 (PSS1), un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza reazioni di scambio di basi per generare fosfatidilserina a partire dalla fosfatidilcolina. Controllando la disponibilità di fosfatidilserina, PSS1 influenza la biogenesi delle membrane, l’asimmetria lipidica e la segnalazione, e sostiene la sintesi a valle di fosfatidiletanolammina tramite decarbossilazione mitocondriale. Questo nodo lipidico si interseca con vie che regolano il traffico vescicolare, il rimodellamento di membrana associato all’apoptosi e la segnalazione immunologicamente rilevante “eat-me”. Alterazioni del metabolismo della fosfatidilserina sono state collegate a fenotipi del neurosviluppo e a più ampi disturbi dell’omeostasi di membrana, rendendo Ptdss1 un bersaglio utile per studi meccanicistici della fisiologia cellulare guidata dai lipidi.

Le particelle di attivazione lentivirale PSS1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ptdss1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PSS1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ptdss1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PSS1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ptdss1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.